尼达尼布(nintedanib)对a549细胞中sp-d有刺激作用-

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所属分类:疗效
摘要

然而,我们发现尼达尼布对a549细胞中sp-d有刺激作用,这是通过有丝分裂原激活蛋白激酶的jnk讯号介导的。虽然有报道说mapk介导sp-d在人角膜上皮细胞中的

  在这项研究中,我们第一次证明了尼达尼布(nintedanib)在mrna和蛋白水平上诱导人肺上皮细胞sp-d的表达。这种效应是通过jnk-ap-1途径介导的,在选择性jnk抑制剂预处置细胞后,这种效应就消失了。实验结果表明,无论浓度多少,尼达尼布(nintedanib)均不影响a549细胞的增殖和去世。此外,我们的数据表明,即使存在酪氨酸激酶抑制剂fgfr、pdgfr和vegfr,尼达尼布(nintedanib)诱导的sp-d表达也会发生。另外,还发现经过尼达尼布
尼达尼布(nintedanib)对a549细胞中sp-d有刺激作用-
(nintedanib)处置的小鼠肺组织中sp-d的表达水平也有所延长。尼达尼布(nintedanib)最初是作为一种有效的酪氨酸激酶胞内抑制剂开发的,然而,我们发现尼达尼布(nintedanib)对a549细胞中sp-d有刺激作用,这是通过有丝分裂原激活蛋白激酶的jnk讯号介导的。虽然有报道说mapk介导sp-d在人角膜上皮细胞中的表达上调,但这种作用尚未在人肺上皮细胞中进行研究。Mapks在各种细胞和环境压力下被激活,例如渗透压或新陈代谢的变化、dna损伤、热休克、缺血、炎症细胞因子、剪切应力、紫外线照射、神经酰胺和氧化应激。

  在这项研究中,发现尼达尼布(nintedanib)激活jnk-ap-1通路,导致sp-d上调。这种作用似乎与酪氨酸激酶抑制无关,因为阻断fgfr、vegfr和pdgfr并不影响尼达尼布(nintedanib)诱导的sp-d表达。这一观察表明,尼达尼布(nintedanib)发挥作用的机制不同于已知的酪氨酸激酶抑制剂的作用。另外,在src激酶抑制剂dasatinib的存在下,尼达尼布(nintedanib)上调了sftpdmrna的表达。本研究表明,尼达尼布(nintedanib)上调sp-d表达的机制不同于其作为src激酶抑制剂的作用。虽然在本研究中,尼达尼布(nintedanib)刺激a549细胞的mapk讯号通路,但据报道它也能抑制mapk和akt讯号通路,这有助于内皮细胞、周细胞和平滑肌细胞的血管生成,从而抑制细胞增殖和凋亡。然而,在这项研究中,尼达尼布(nintedanib)对a549细胞的mapk有相反的作用。虽然sp-d现如今被广泛用作ipf的生物标志物,但最近的研究表明,sp-d除了作为先天免疫系统分子的作用之外,对各种病理状态也有有益的影响。

  相当多的注意力集中在阐明诱发特发性肺纤维化的致病机制上,并且在损伤后肺泡上皮细胞的凋亡已被证明能够加速病情的进展。Sp-d减少了小鼠的肺泡巨噬细胞凋亡率,但这一结果可能与sp-d对人肺上皮细胞a549的影响无关。在目前的研究中,我们并没有研究尼达尼布(nintedanib)对细胞凋亡的直接影响,但是,尼达尼布(nintedanib)诱导的sp-d表达可能抑制上皮细胞的凋亡,未来的研究应该检验这种可能性。例如,破坏dna的恶性肿瘤药物依托泊苷和喜树碱通过激活jnk-c-jun通路与凋亡诱导有关。然而,c-jun蛋白与诱导和预先防范细胞凋亡都有关联,c-jun激活是促进还是预先防范细胞凋亡高度依赖于所研究的细胞类别。此外,通过mapk通路激活表现出来的基因表达模式很可能存在很大差异(甚至在同一类别的细胞中也是如此),并且依赖于细胞所受到的刺激。因为a549细胞最初来源于肺癌标本,所以人们担心尼达尼布(nintedanib)诱导的mapk讯号可能会导致a549细胞的异常增殖和生长,或者通过jnk磷酸化诱导细胞凋亡。但是,根据细胞增殖实验结果,在实验浓度范围内,尼达尼布(nintedanib)对细胞增殖和凋亡无影响。

  尼达尼布(nintedanib)对a549细胞中sp-d有刺激作用,在目前的研究中,我们观察到尼达尼布(nintedanib)不影响sp-b在a549细胞中的表达水平。在人类细胞中,没有供体减少sp-b启动子的活性,这是通过延长ap-1结合介导的,而sp-b的降低也是c-jun过度表达的结果。在原代大鼠ii型肺细胞中未发现sp-d基因表达下降[30]。因此,这些数据表明,不同的作用机制调节ap-1对sp-b和sp-d基因表达的影响。我们的观察结果与这些报道一致,因为无论jun蛋白磷酸化阶段怎样,尼达尼布(nintedanib)都不能刺激sftpbmrna的表达,这意味着尼达尼布(nintedanib)诱导的sftpd表达是相对特异的ー至少在a549人肺上皮细胞中是如此。为了检查尼达尼布(nintedanib)在体内的作用,我们给c57bl/6小鼠注射了尼达尼布(nintedanib),并用实时定量rt-pcr和westernblot分析检查了sp-d在肺中的表达。我们观察了提高尼达尼布(nintedanib)医治小鼠肺中sftpdmrna表达的情况。由于小鼠在sftpb基因的5′-侧翼区域也有ap-1识别序列,因此我们分析了经尼达尼布(nintedanib)处置的小鼠肺组织中sftpb的表达,结果提示尼达尼布(nintedanib)抑制了sftpbmrna的表达。尽管在sftpb启动子区域存在一个一致的ap-1位点,但是仍有报道表明jun依赖性抑制sftpb启动子的活性,这表明jun依赖性基因调控的机制不同。我们关于尼达尼布(nintedanib)对sftpbmrna表达影响的观察结果与先前的研究相一致,这表明ap-1介导了sftpb的抑制作用。

  虽然sftpdmrna表达在尼达尼布(nintedanib)医治的小鼠肺中表现出上调,但结果并不具有统计学意义,尼达尼布(nintedanib)对a549细胞中sp-d有刺激作用。这个结果可能是由于使用了整个肺匀浆,这可能减少了实验的灵敏度。在体内研究中使用的剂量与先前的研究相当。Westernblot分析显示,经尼达尼布(nintedanib)处置的小鼠肺组织中sp-d蛋白表达上调与尼达尼布(nintedanib)处置有关,这些体内观察能够使我们的体外研究在生理上具有相关联性。本研究有两个主要局限性。首先,我们用a549细胞作为ii型肺细胞模型。然而,a549是一个来源于人肺腺癌的连续细胞系,因此a549细胞具有不同于正常肺上皮细胞的生物学特性。其次,本研究中使用的尼达尼布(nintedanib)的浓度似乎高于人体每日摄入300mg尼达尼布(nintedanib)所高达的cmax。然而,在体外测试化合物时,这种差异很常见,而且这项研究中使用的浓度与先前研究中使用的浓度相当。为了解决这个问题,我们需要在临床实验中探讨尼达尼布(nintedanib)对sp-d表达的影响。尼达尼布(nintedanib)好购买到吗?吃尼达尼布(nintedanib)要好多钱30天?详情请扫码咨询:

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