尼达尼布(nintedanib)能够进一步探索作为滑膜肉瘤的潜在医治手段-

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所属分类:疗效
摘要

被检查的细胞株表达恶性周围神经鞘肿瘤的PDGFR、FGFR和VEGFR家族,滑膜肉瘤细胞株显示尼达尼布药品靶点最大数量的表达。尼达尼布能够进一步探索作为滑膜肉瘤

  尼达尼布(nintedanib)的靶点RTKs在多个肉瘤细胞系中表达

  尼达尼布(nintedanib)是一种小分子抑制剂,靶向肿瘤血管生成中涉及的多种RTKs,如VEGFR、PDGFR和FGFR。它是一种吲哚酮衍生物,已被证明能够阻断RTKs,如低纳摩尔浓度的VEGFR和PDGFR家族,还能够阻断周细胞和内皮细胞中下游的MAPK和AKT讯号传导。测试基础表达水平尼达尼布(nintedanib)药品目标,我们进行了免疫印迹分析使用9不同肉瘤细胞系属于各种亚型如尤因肉瘤、脂肪肉瘤、恶性周围神经鞘瘤(对于ST8814)、滑膜肉瘤和骨肉瘤。被检查的细胞株表达恶性周围神经鞘肿瘤的PDGFR、FGFR和VEGFR家族,滑膜肉瘤细胞株显示尼达尼布(nintedanib)药品靶点最大数量的表达。尼达尼布(nintedanib)能够进一步探索作为滑膜肉瘤的潜在医治手段吗?

  尼达尼布(nintedanib)在表达PDGFR和FGFR的肉瘤细胞系中显示出强大的抗增殖活性和抑制下游讯号转导

  为了测试尼达尼布(nintedanib)在多种肉瘤细胞系中的抗增殖作用,我们在延长药品浓度6天后进行了细胞活力测定。尼达尼布(nintedanib)处置会抑制细胞增殖,尤其是在同时表达RTKsPDGFR和FGFR家族的细胞系中。MPNST、ST8814以及滑膜肉瘤细胞株(SYO-1,HS-SY-II)在纳米范围内的细胞增殖受到抑制,与Ewing肉瘤细胞株(A673和CHP100)相比。在微摩尔浓度下,脂肉瘤细胞株(DDLS,LS141)和骨肉瘤细胞株SaOS2被观察到具有适度的活性。SYO-1和ST8814细胞系IC50值

  为了检查尼达尼布(nintedanib)对下游讯号通路的抑制作用,我们在4个细胞系(根据抗增殖效果选择)中延长尼达尼布(nintedanib)的剂量,进行了Westernblot分析。在SYO-1和ST8814细胞系中,延长尼达尼布(nintedanib)剂量的医治可显著抑制p-AKT。在SYO-1细胞株中也观察到p-ERK1/2的抑制,而在ST8814细胞株中未见p-ERK1/2的抑制。这可能部分是由于ST8814细胞系具有较高的基础水平的p-ERK1/2,由于该细胞系NF1(1型神经纤维瘤病)的缺失和Ras活性的延长,p-ERK1/2难以抑制。另一方面,A673和CHP100细胞在尼达尼布(nintedanib)处置后p-AKT和p-ERK1/2水平无变化。这与观察结果相关,即即使在微摩尔浓度的药品下,这两种细胞系也没有表现出明显的增殖抑制。

  为了测试药品医治是否会抑制不同细胞系的RTKs,我们对上述4个细胞系进行了phospho-RTK蛋白组阵列分析。尼达尼布(nintedanib)医治(在500nmol/L)导致了RTK差别明显对这些目标包括PDGFRα和PDGFRβ测试所有的细胞系包括A673和CHP100。这表明,尽管PDGFRβ被尼达尼布(nintedanib)的磷酸化,缺乏抗增殖效果两尤因肉瘤细胞株A673CHP100可能是由于这一事实以外的途径PDGFR如Ins-R和IGF-1R推动细胞增殖。虽然我们可以观察到SYO-1和ST8814细胞系中磷酸化的RYK水平,但它不太可能在驱动肉瘤细胞生长中发挥任何重要作用,尤其是因为它自身缺乏任何催化活性。

  在表达高水平VEGFR2的SYO-1细胞系中,无论是通过RTK阵列还是通过Westernblot分析,我们都无法检查到任何磷酸化的VEGFR2。AXL是一种特点良好的RTK,已被证实是在gist中伊马替尼(imatinib)耐受药物的结果。为了检查尼达尼布(nintedanib)处置是否诱导AXL,我们进行了Westernblot分析。我们的结果表明,SYO-1细胞缺乏总水平和磷酸化的AXL水平。Westernblot检查显示CHP100细胞株存在AXL受体总量;然而,无论是否用尼达尼布(nintedanib)处置细胞,都无法检查到磷酸化的AXL。接下来,我们想测试尼达尼布(nintedanib)医治是否导致非rtks的下调,如SRC家族激酶,一个已知的尼达尼布(nintedanib)下游靶点。

  根据phospho-SRCTyr416Westernblot分析,尼达尼布(nintedanib)处置后并没有激活SRC家族激酶。尼达尼布(nintedanib)医治后SRC总水平未见变化。我们还使用non-RTKproteinprofilerarraykit(R&DSystems)对非rtk磷酸化进行了分析。在SYO-1和CHP100细胞系中,阵列检查到的大部分非rtks包括JNK、GSK3、、c-Jun、PRAS40和HSP60激酶。磷酸化FAK仅在SYO-1细胞系中检查到;然而,尼达尼布(nintedanib)医治后FAK的磷酸化没有明显变化。此外,在两种细胞系中,在SYO-1细胞系中,除了p53磷酸化外,未观察到任何非rtks磷酸化的主要变化。我们无法在非rtk阵列上检查到任何磷酸化的SRC。

  尼达尼布(nintedanib)的抗增殖活性是坚持抑制p-AKT和p-ERK1/2的结果

  确定尼达尼布(nintedanib)的抑制作用是由于抑制p-AKT和p-ERK途径相结合,我们测试了MEK抑制剂的功效(MEKi)selumetinib和AKT抑制剂(AKTi)mk-2206单独或组合和抑制效对应尼达尼布(nintedanib)和伊马替尼(imatinib)相比,另一个著名的c-kit和PDGFR抑制剂。实验显示,尼达尼布(nintedanib)对滑膜肉瘤细胞株SYO-1的抑制作用显著(P<0.01和P<0.05)优于伊马替尼(imatinib)单独或MEKi和AKTi联合。另一方面,CHP100(Ewing肉瘤)细胞株未观察到明显的增殖抑制。在ST8814细胞株中,MEKi和AKTi联用对细胞增殖的抑制效果明显优于单独使用尼达尼布(nintedanib)。对于A673细胞系,尼达尼布(nintedanib)医治与未对照相比,未导致明显的细胞增殖抑制;然而,MEKi和AKTi联合处置显著抑制了增殖。药品医治24小时后Westernblot检查通路抑制结果显示,单独或联合AKTi均不能抑制p-ERK1/2。

  另一方面,尼达尼布(nintedanib)处置可显著抑制SYO-1细胞株的p-AKT和p-ERK1/2水平。尼达尼布(nintedanib)与MEKi联合处置时,与单独尼达尼布(nintedanib)相比,尼达尼布(nintedanib)进一步抑制了细胞增殖(P<0.05),并进一步抑制了P-erk1/2水平。在Ewing肉瘤细胞系A673和CHP100中未观察到下游讯号通路的抑制。值得注意的是,当药品医治3天后测定细胞活力时,尼达尼布(nintedanib)与MEKi和AKTi联合医治对SYO-1细胞系的细胞增殖抑制作用似乎是相似的。然而,在药品暴露6天后进行实验时,与MEKi和AKTi联用相比,尼达尼布(nintedanib)处置导致细胞增殖进一步受到抑制。

  尼达尼布(nintedanib)的抗增殖活性是PDGFR和FGFR途径联合抑制的结果

  为了验证尼达尼布(nintedanib)
尼达尼布(nintedanib)能够进一步探索作为滑膜肉瘤的潜在医治手段-
的抑制作用是不是通过抑制PDGFR和/或FGFR途径介导的,我们在尼达尼布(nintedanib)或pan-FGFR抑制剂PD173074医治后进行了细胞增殖实验和Westernblot分析。与DMSO对照相比,使用pan-FGFR抑制剂PD173074抑制细胞增殖的效果显著(P<0.001)。然而,尼达尼布(nintedanib)对细胞增殖的抑制效果明显优于PD173074(P<0.01),尤其是在500和1000nmol/L浓度下。Westernblot分析显示,经PD173074处置后,SYO-1细胞株的p-ERK1/2讯号明显受到抑制;但是,没有降低p-AKT讯号观察。尼达尼布(nintedanib)医治,另一方面,显示显著降低p-AKT以及p-ERK1/2讯号在500nmol/L浓度。结果尼达尼布(nintedanib)和pan-FGFR抑制SYO-1细胞系强烈建议的角色结合抑制PDGFR和FGFR下调p-AKT讯号与抑制FGFR活动仅下调p-ERK1/2讯号。无显著抑制细胞增殖或任何降低下游p-AKT讯号在CHP100细胞系。有趣的是,基底CHP100细胞系的p-ERK1/2水平较低而SYO-1细胞系后,只显示适度降低尼达尼布(nintedanib)或PD173074医治。

  另一种多靶点激酶Pazopanib最近被批准用于医治软组织肉瘤。为了测试在SYO-1中尼达尼布(nintedanib)医治是否优于pazopanib医治,我们进行了细胞活力测定和Westernblot分析来对比它们的治疗效果。尼达尼布(nintedanib)对SYO-1细胞系的抑制作用明显优于pazopanib(P<0.05)。正如前面看到的,尼达尼布(nintedanib)医治(在1000nmol/L)导致抑制p-AKT以及p-ERK1/2,而pazopanib医治(在1000nmol/L)的p-AKT差别显示对这些讯号的差别但没有表现出任何对这些p-ERK1/2讯号强烈暗示尼达尼布(nintedanib)待遇优越的滑膜肉瘤设置。此外,最近有研究表明,与其他同类竞争分子如舒尼替尼(sunitinib)、pazopanib和vandetanib相比,尼达尼布(nintedanib)对三重血管激酶面板具有更强的抑制作用。

  为了进一步证实PDGFR和FGFR在促进细胞增殖中的作用,我们进行了sirna介导的SYO-1细胞系细胞增殖分析。与对照siRNA相比,siRNA介导的单个RTKs(PDGFR、FGFR1和FGFR2)敲低可显著抑制细胞增殖(P<0.01)。然而,与单或双sirna介导的RTK沉默相比,PDGFRinhibitor、FGFR1和FGFR2的联合抑制(因此,模拟尼达尼布(nintedanib)医治)可进一步抑制细胞增殖(P<0.05)。Westernblot显示,siRNA处置导致RTKs显著下调。在使用泛fgfr抑制剂PD173074时,sirna介导的FGFR1和FGFR2敲低导致pERK1/2下调,而只有PDGFRfr和FGFR1以及FGFR2同时敲低才导致p-AKT讯号下调。

  与伊马替尼(imatinib)相比,尼达尼布(nintedanib)在SYO-1异种移植模型体内显著抑制肿瘤生长

  为了检验尼达尼布(nintedanib)在体内的医治效果,我们采用SYO-1异种移植模型进行了小鼠异种移植实验。我们对比了初期体外测试的尼达尼布(nintedanib)对伊马替尼(imatinib)的体内治疗效果。与对照剂相比,伊马替尼(imatinib)和尼达尼布(nintedanib)医治均显著抑制(P<0.05和P<0.005)肿瘤生长。但尼达尼布(nintedanib)医治后肿瘤抑制效果明显优于伊马替尼(imatinib)(P<0.01)。对尼达尼布(nintedanib)医治3周后获得的组织标本进行Westernblot分析显示,与伊马替尼(imatinib)医治相比,尼达尼布(nintedanib)能够诱导裂解的PARP(凋亡的替代标记物),并能更好地抑制FGFR、p-AKT和p-ERK1/2的磷酸化。

  因为尼达尼布(nintedanib)除了阻断PDGFR和FGFR外,还阻断了VEGFR,所以我们通过CD31免疫组化检查了尼达尼布(nintedanib)医治对肿瘤血管系统的影响。根据之前的报道,尼达尼布(nintedanib)医治可抑制肿瘤血管密度,与载体控制相比,褐色免疫组化染色完全消失。另一方面,伊马替尼(imatinib)医治未显示CD31染色降低。SYO-1异种移植物的体内肿瘤生长数据、Westernblot分析和免疫组化结果证实了我们的体外发现,尼达尼布(nintedanib)能够进一步探索作为滑膜肉瘤的潜在医治手段。尼达尼布(nintedanib)一瓶好多钱?一般的患病者30天需要服用几盒呢?花掉多吗?如果是吃专利药估计没几个患病者能够承受的起,还好有了仿制药物,怎么选购仿制药物呢?快来咨询[药道网]吧。详情请扫码咨询:

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